公司电话:

028-85137825

产品目录
Carrier RNA
Carrier RNA     
 产品: 
 
货号 规格 价格
MB-CRNA-1dry 1 mg (干粉) ¥230
MB-CRNA-1 1 ml (1 μg/μl) ¥210
MB-CRNA-6 1 ml (6 μg/μl) ¥650
MB-CRNA-30 30 ml (6 μg/μl) ¥18000
   

 产品介绍:
    本品是片段在120nt - 2900nt之间的RNA混合物,溶解于miRbay™ RNA保存液中,-20℃冰箱中液态保存,无需解冻,直接使用。加入10%体积,不影响逆转录效率。在酸苯酚法或核酸柱纯化体系中添加Carrier RNA,可提高10倍以上微量核酸的回收效率。本品保证miRNA-free、DNase-free、RNase-free。如果需要水为介质,订购时请说明。

● 保存条件及有效期:  -20℃, 2年;2 - 8℃ 4周;室温 1周。4 - 8℃运输

● 使用方法:

 



   在酸酚法或柱纯化微量样本核酸的过程中,如miRNA纯化、病毒RNA纯化、病毒DNA纯化及微量DNA提取等实验,微量的核酸不能被有效地沉淀,或在纯化柱上的结合和洗脱效率低,导致不能回收到足够的核酸模板,最终使检测失败。在核酸纯化体系中添加Carrier RNA,可提高10倍以上微量核酸回收率,同时,由于Carrier RNA的存在,还可减少容器对目标RNA的吸附、以及核酸酶对微量目标RNA的降解几率。Carrier RNA是miRNA和微量RNA纯化中不可缺少的组成成份。在微量核酸纯化体系的裂解液中,用户可以在1 - 5 μl Carrier RNA范围内选择适合的用量。获得含有Carrier RNA的微量核酸可直接用于PCR反应、或RT-PCR反应。  
 
   

● 质量控制:

1. 本品对符合外观、纯度和浓度要求的批次,以1/500的比例抽检,进行电泳检测。本品95%片段在120nt以上。

2. 本品对PCR反应效率的影响
通过特殊设计的PCR引物:LS2781/LS2782,在qPCR反应中高效产生独特扩增片段。实时PCR反应中加入本品,检测对PCR效率的影响。
主要设备:Bio-Rad, CFX96, C1000
待测物:Carrier RNA,1 μg/μl
溶剂对照:RNA保存液。
实时荧光PCR反应设置:
1. 20 μl PCR mix + 1 μl RNA保存液 + 4 μl H2O
2. 20 μl PCR mix + 1 μl Carrier RNA + 4 μl H2O
3. 20 μl PCR mix + 3 μl RNA保存液+ 2 μl H2O
4. 20 μl PCR mix + 3 μl Carrier RNA + 2 μl H2O
5. 20 μl PCR mix + 5 μl H2O
 
 


实时荧光PCR扩增结果:

加入3 μl Carrier RNA,循环数差异小于0.5。
 

●应用实例:

1. Carrier RNA对微量胎牛血清中miRNA核酸纯化效率的影响
实验目的:验证添加Carrier RNA对微量样本miRNA核酸纯化回收效率的影响。
主要试剂: Trizol LS Reagent(Life Tech)、Carrier RNA(诺恩基因)、胎牛血清(Life Tech), miR-126/122/192-miRFLP微核酸检测试剂(诺恩基因)。
主要设备:ABI3730xl荧光毛细管电泳仪、耶拿PCR仪、超声水浴锅。
实验方法:
1. 根据Trizol试剂盒说明书的操作步骤,按照下列方案进行操作,提取胎牛血清总RNA。纯化的RNA溶解于10 μl RNase-free蒸馏水。
2. 对纯化的RNA样本1、及RNA样本2 ,以及1 μl胎牛血清进行miRFLP检测,测定miR-126/miR-122/miR-192的含量,结果:
3. miRFLP测定图谱:
4. 讨论与分析:未加Carrier RNA的1号样本中,完全没有测到miRNA信号。血清上样量很少,仅10 μl,在提纯步骤中RNA丢失、沉淀不完全、以及管壁吸附等原因,造成RNA回收困难。加入25 μg Carrier RNA,使RNA回收率大幅提高。但与不经提纯步骤的3号样本检测结果相比,回收率在9%-20%的范围内。核酸纯化时,添加Carrier RNA可以大幅提升微量核酸回收效率。RT反应中,加入Carrier RNA,提高微量样本中核酸检出率。